CCK-8 kit WST-8 细胞增殖 细胞活性

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文章摘要:CCK,课题研究何足忙着,跳跳虎捐出一退六二。

名称:CCK-8 kit WST-8 细胞增殖 细胞活性

供应商:上海炎熙生物科技有限公司

价格:480.00元/瓶

最小起订量:1/瓶

地址:上海市徐汇区大木桥路599号

产品编号:122850832

更新时间:2018/10/21 13:47:04

发布者IP:101.229.80.164

详细说明

  CCK-8试剂 盒

  Cell Counting Kit -8

货号规格
? ?CT-K-55毫升,500次
CT-K-1010毫升,1000次

  检测原理

  CCK-8试剂 盒是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞活性的快速高灵敏度检测试剂盒。

  WST-8属于MTT的升级产品,能在电子载体1-甲氧基PMS的作用下被还原成水溶性甲臜产物,生成的甲臜量与活细胞数量成正比,因此颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值,可以反映活细胞数量。

  CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:

  ★灵敏度高,数据可靠,重现性好

  ★操作简便,省时省力

  ★水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

  ★无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

  ★为1瓶溶液,毋需预制,即开即用

  ★适合于高通量药物筛选

  CCK-8用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

  CCK-8方法的优势

  CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法MTT法XTT法WST-1法CCK-8法
甲臜产物的水溶性差(需加有机溶剂溶解后再检测)
产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液
使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用
检测灵敏度很高很高
检测时间较长较短较短最短
检测波长560-600 nm420-480 nm420-480 nm430-490 nm
细胞毒性高,888真人彩票:细胞形态完全消失很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变
试剂稳定性一般较差一般很好
批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合
便捷程度一般便捷便捷非常便捷

  保存条件:

  4oC避光保存一年有效,?-20oC避光保存两年有效。 避免反复冻融。

  CCK-8试剂 盒操作说明

  CCK-8溶液可直接加到细胞中,不需要与其它组分预混。由于CCK-8溶液非常稳定并且细胞毒性很小,所以可以进行长时间孵育,例如孵育24-48小时。

  在进行以下实验之前,可先设置空白对照孔,仅加入相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液,不加入细胞。

  方法一.?制作标准曲线(测定细胞具体数量)

  1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

  2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

  3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后按培养基体积的10%加入CCK-8试剂,培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

  方法二.?细胞活性检测

  1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。

  2、向每孔加入10?μL CCK-8溶液。

  3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

  方法三.?细胞增殖-毒性检测

  1、在96孔板中加入90 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。

  2、向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。

  3、将培养板在培养箱中孵育适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

  4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液。

  5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

  活力计算:

  细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(不加药)-A(空白)] ×100

  A(加药):具有细胞、CCK?溶液和药物溶液的孔的吸光度

  A(空白):具有培养基和CCK?溶液而没有细胞的孔的吸光度

  A(0 加药):具有细胞、CCK?溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

  细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

  注意事项:

  1,由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、 水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。

  2,本试剂 盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应, 所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。培养基中酚红和血清的吸光度,在计算时通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

  3,有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。加完之后最好能够离心,以免CCK-8液滴悬挂在壁上。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

  4,若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10?μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

  5,建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。白细胞可能需要培养较长时间。若使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

  6,若没有450nm的滤光片,可使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。

  7,金属对CCK-8显色有影响。终浓度为1 mM的氯化亚铅、氯化铁、CuSO4会抑制5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话,将会100%抑制。

  8,本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。